胆毳炎小鼠模型的建立与检测方法 [复制链接]

摘要：本研究旨在建立一种胆毳炎小鼠模型，并探讨其检测方法。通过给小鼠注射胆酸钠和大肠杆菌，成功建立了胆毳炎模型。检测样品包括血液、肝脏和胆囊组织，检测项目包括肝功能指标、炎症因子水平和组织病理学变化。检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量PCR(qPCR)和组织病理学检查。检测仪器包括酶标仪、荧光定量PCR仪和显微镜。结果表明，胆毳炎小鼠模型具有明显的肝功能异常和炎症反应，组织病理学检查显示胆囊和肝脏组织出现明显的炎症和纤维化。本研究为胆毳炎的发病机制研究和治疗提供了一种可靠的动物模型。

一、引言

胆毳炎是一种常见的胆道疾病，其发病机制复杂，治疗困难。建立合适的动物模型对于研究胆毳炎的发病机制和治疗方法具有重要意义。本研究通过给小鼠注射胆酸钠和大肠杆菌，成功建立了胆毳炎模型，并探讨了其检测方法。

二、材料与方法

(一)实验动物

雄性C57BL/6小鼠，体重20-25g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

(二)实验试剂

胆酸钠(Sigma-Aldrich)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(RDSystems)、实时荧光定量PCR(qPCR)试剂盒(Takara)、组织病理学检查试剂盒(Sigma-Aldrich)。

(三)实验仪器

酶标仪(Bio-Rad)、荧光定量PCR仪(ABI)、显微镜(Olympus)。

(四)实验方法

1.胆毳炎小鼠模型的建立

将小鼠随机分为对照组和模型组，每组10只。模型组小鼠腹腔注射胆酸钠(mg/kg)和大肠杆菌(1×10^8CFU/kg)，对照组小鼠腹腔注射等量的生理盐水。注射后24h处死小鼠，收集血液、肝脏和胆囊组织。

2.检测样品的制备

(1)血液样品的制备：将小鼠处死，心脏采血，离心分离血清，-80℃保存备用。

(2)肝脏和胆囊组织样品的制备：将小鼠处死，取出肝脏和胆囊组织，用生理盐水冲洗干净，切成小块，-80℃保存备用。

3.检测项目和方法

(1)肝功能指标的检测：采用ELISA试剂盒检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)的水平。

(2)炎症因子水平的检测：采用qPCR试剂盒检测肝脏和胆囊组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平。

(3)组织病理学变化的检测：将肝脏和胆囊组织进行石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察组织病理学变化。

三、结果

(一)肝功能指标的变化

与对照组相比，模型组小鼠血清中ALT、AST、TBIL和DBIL的水平显著升高(P0.05)，表明胆毳炎小鼠模型具有明显的肝功能异常。

(二)炎症因子水平的变化

与对照组相比，模型组小鼠肝脏和胆囊组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平显著升高(P0.05)，表明胆毳炎小鼠模型具有明显的炎症反应。

(三)组织病理学变化

显微镜下观察发现，模型组小鼠胆囊和肝脏组织出现明显的炎症和纤维化，表现为胆囊壁增厚、胆囊黏膜上皮细胞脱落、肝脏细胞肿胀、坏死和纤维化等。

四、讨论

本研究成功建立了胆毳炎小鼠模型，并探讨了其检测方法。结果表明，胆毳炎小鼠模型具有明显的肝功能异常和炎症反应，组织病理学检查显示胆囊和肝脏组织出现明显的炎症和纤维化。本研究为胆毳炎的发病机制研究和治疗提供了一种可靠的动物模型。

五、结论

本研究建立了一种胆毳炎小鼠模型，并探讨了其检测方法。该模型具有明显的肝功能异常和炎症反应，组织病理学检查显示胆囊和肝脏组织出现明显的炎症和纤维化。本研究为胆毳炎的发病机制研究和治疗提供了一种可靠的动物模型。